|
Barwienie metodą Grama
Barwienie metodą GramaMetoda Grama – metoda
barwienia
bakterii
. Pozwala doświadczalnie zróżnicować te organizmy na dwie duże grupy (
Gram-dodatnie
i
Gram-ujemne
) ze względu na różnice w budowie
ściany komórkowej
oraz, co za tym idzie, także pewne różnice w
fizjologii
i podatności na
leki
. Została opracowana w
1884
przez
Duńczyka
,
Hansa Christiana Grama
(
1853
–
1938
). Sposób barwienia- na odtłuszczone
szkiełko podstawowe
nanieść bakterie i po ewentualnym dodaniu
płynu fizjologicznego
wykonać
rozmaz
- szkiełko z rozmazem pozostawić do całkowitego wyschnięcia, po czym
preparat
utrwalić
przez trzykrotne przesunięcie nad płomieniem palnika
- utrwalony preparat zalewać nad rynienką roztworem
fioletu krystalicznego
- odczekać 60 sekund
- tryskawką delikatnie zmyć barwnik
- zalać preparat
jodyną
lub
płynem Lugola
- odczekać 30 sekund
- ostrożnie odbarwić całość w
etanolu
przez ok. 10-20 sekund
- spłukać preparat wodą destylowaną
- dobarwić innym barwnikiem, np. safraniną czy
fuksyną zasadową
przez ok. 30 sekund
- dobrze spłukać preparat wodą destylowaną i po wyschnięciu oglądać pod
mikroskopem
Mechanizm barwienia- Komórki bakteryjne, zarówno gramdodatnie, jak i gramujemne, zabarwiają się fioletem krystalicznym.
- Dodanie płynu Lugola powoduje, że fiolet reaguje z
jodem
, w wyniku czego tworzą się stosunkowo duże kompleksy złożone z barwnika i jodu. Na tym etapie obydwa typy komórek mają zabarwienie granatowe.
- Płukanie w alkoholu powoduje, że w komórkach Gram-dodatnich następuje zmniejszenie pustej przestrzeni w wielowarstwowych ścianach komórkowych, mających wygląd wielu (ok. 50) nałożonych na siebie siatek. W rezultacie kompleksy fioletu krystalicznego z jodem nie mogą ulec wypłukaniu, co w przypadku 1–2 warstw u bakterii Gram-ujemnych nie jest przeszkodą i alkohol świetnie wypłukuje barwnik.
- Po zakończonym płukaniu komórki Gram-dodatnie są granatowe, zaś Gram-ujemne – bezbarwne.
- Dodatkowy barwnik (np. safranina,
fuksyna
) dobarwia, niezbyt mocno, komórki Gram-ujemne, nie zmieniając barwy komórek Gram-dodatnich.
Efekt barwienia GramaW efekcie wyżej przedstawionych działań i opisanego mechanizmu komórki efekty mogą być trojakie: - bakterie barwią się na kolor ciemno-fioletowy, prawie czarny, określamy jako
Gram-dodatnie
lub (Gram +)
- bakterie barwią się w kolorze czerwonym, określamy jako
Gram-ujemne
lub (Gram -)
- bakterie nie barwią się w ogóle metodą Grama
Zobacz też Bibliografia-
Władysław J.H. Kunicki- Goldfinger
: Życie bakterii. Warszawa: Wydawnictwo Naukowe PWN, 1998. .
Inne hasła zawierające informacje o "Barwienie metodą Grama":
Zawał mięśnia sercowego
...
Ciałko nerkowe
...
Język prasłowiański
...
Woda wapienna
...
Archeologia
...
Amfibolit
...
Genealogia
...
Termometr
...
Płyn Lugola
...
Hans Eysenck
...
Inne lekcje zawierające informacje o "Barwienie metodą Grama":
027. Empiryzm Davida Hume`a (plansza 24)
...
Mangan i jego związki (plansza 25)
...
Mangan i jego związki (plansza 24)
...
|
|
|
|