Na zalesionych terenach Roztocza Wschodniego często występują gatunki roślinności stepowej (pontyjskiej). Żyją również zwierzęta typowe dla Polski, takie jak jelenie, sarny, dziki, a także inne, rzadko spotykane, np. głuszce, węże eskulapa czy salamandry plamiste. Roztocze nie jest regionem mocno zurbanizowanym. Większość mieszkańców stanowi ludność wiejska. Osadnictwo wiejskie jest rozproszone, obejmuje liczne wsie, przysiółki i pojedyncze zagrody. Mieszkańcami Roztocza są Polacy oraz we wschodniej części Ukraińcy. W regionie oprócz wyznania rzymskokatolickiego jest wielu grekokatolików. Przed II wojną światową teren ten zajmowali Żydzi. Większość zginęła podczas wojny lub wyemigrowała.